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    小反芻獸疫競爭ELISA抗體檢測試劑盒使用說明書

         更新時間:2019-06-19       瀏覽量:
    【產品名稱】
    通用名稱:小反芻獸疫競爭ELISA抗體檢測試劑盒
    英文名稱:Competition ELISA test kit for Detecting Peste des Petits Ruminants virus antibodies
    【用途】 用于檢測羊血清中的小反芻獸疫抗體。
    規格】 2塊96孔ELISA板。
    【儲藏與有效期】 2~8℃保存,有效期9個月。
    【試劑盒組成】
    名稱 數量
    抗原包被板(PPRV) 2塊(96孔)
    20×洗滌液 1瓶(30mL/瓶)
    PPRV陰性血清 1管(200uL/管)
    PPRV陽性血清 1管(200uL/管)
    酶標單抗5× 2管(1mL/管)
    TMB底物 1瓶(10mL/瓶)
    終止液 1瓶(10mL/瓶)
    樣品稀釋液 1瓶(14mL/瓶)
    說明書 1份
    【溶液配制】 洗滌液(1×PBST):將本試劑盒配備的20×洗滌液用無離子水或超純水作1:20稀釋。
    將酶標單抗5×用樣品稀釋液做5倍稀釋配制工作濃度的酶標單抗1×。
    【實驗準備】所有試劑使用前恢復至室溫(25℃左右),加液前充分搖勻。
    【操作步驟】
    PPRV抗原包被板上陰性血清N、陽性血清P、樣品稀釋液Cm和樣品S的分布如圖所示:

    1.加樣:每塊ELISA反應板均需分別設置2孔陰性對照(A1B1)、2孔陽性血清對照(C1D1),2孔稀釋液對照(E1F1),加樣如下:在A1和B1孔內分別加入50uL/孔PPRV陰性對照血清,在C1和D1孔內分別加入50uL/孔PPRV陽性對照血清,在E1和F1孔內分別加入50uL/孔的樣品稀釋液。其他孔為被檢樣品孔,每孔先加入25uL的樣品稀釋液,再分別加入25uL的被檢血清。輕輕震勻后于37℃溫育60分鐘。
    2.甩掉包被板孔中的液體,每孔加入約300μL洗滌液1×,洗板4遍,拍干后每孔加入50μL酶標單抗1×,震蕩混勻, 37℃溫育30分鐘。
    3.甩掉包被板孔中的液體,每孔加入約300μL洗滌液,洗板4遍,拍干,加入TMB底物,50uL/孔。37℃避光溫育15分鐘。
    4.終止讀數:在上述每孔加入50uL終止液后在酶標儀450nm波長處,測定光吸收值。
    【結果判定】
    1. PPRV陰性血清的平均OD值即ODNC;PPRV陽性血清的平均OD值即ODPC;酶標單抗平均OD值即ODCm;樣品的OD值即ODS 。按照以下方法計算抑制率PI
    陽性血清抑制率即 PIPC= [1-ODPC/ODCm)] ×100%
    陰性血清抑制率即 PINC= [1-ODNC/ODCm)] ×100%
    樣品血清抑制率即 PIS= [1-ODS/ODCm)] ×100%
    判定標準
    1.當PIPC 大于60%,PINC小于40%時試驗成立,否則該次檢測結果無效,否則重新進行試驗。
    2.被檢樣品PIS大于50%時,判為小反芻獸疫抗體陽性;被檢樣品PIS≤50%時,判為小反芻獸疫抗體陰性。
    【注意事項】
    1. 所有試劑使用前恢復至室溫(25℃左右),以免溫度過低影響抗原抗體反應。
    2. 實驗前應用溫度計檢查溫箱溫度,溫度過高或過低影響OD值高低。
    3. 包被板反應時嚴禁堆疊放置,應該平鋪且板間有空隙,不要離溫箱壁太近。
    4. 實驗所用移液器及設備應定期校準。
    5. 采集的樣品要新鮮,并且最好不要溶血。血清標本在2~8℃放置不要超過2天,室溫不超過8小時,如需長時間放置應儲存于-20℃。
    6. 底物液和終止液對皮膚有刺激性,請帶手套注意個人防護。 
    【技術支持】 王金良                                   電話:0543-3403060
    僅供獸醫診斷使用



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    編輯:熊方方




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