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    山羊痘病毒抗體ELISA檢測試劑盒使用說明書

         更新時間:2021-01-15       瀏覽量:
    山羊痘病毒抗體ELISA檢測試劑盒使用說明書
    Service manual of ELISA Kit for GTP Virus antibody
     
    【產品簡介】山羊痘(GTP)是由山羊痘病毒感染山羊引起的一種急性、熱性和高度接觸性傳染病。在山羊痘的免疫預防工作中,接種了山羊痘疫苗后,由于多種因素可能導致羊不產生或產生低水平山羊痘病毒抗體。
    本試劑盒采用酶聯免疫吸附試驗檢測羊血清中GTPV抗體,用于免疫山羊痘疫苗后的抗體動態水平監測,指導免疫預防工作,評估羊場山羊痘免疫狀況,也可用于山羊痘的流行病學調查。
    【產品內容】
    試劑盒主要成分  
    抗原包被板(GTPV) 96T×1
    陽性對照  1ml×1
    陰性對照  1ml×1
    酶標結合物 10ml×1
    樣品稀釋液 20ml×1
    底物液 10ml×1
    終止液 7ml×1
    濃縮洗滌液(20×) 50ml×1
    封口膠 1份
    使用說明書 1份
    【成分性狀】 
    包被板 96孔塑制微孔板,無色透明,干燥,無雜質吸附
    酶標結合物 略帶黃色澄明液體
    陰、陽性對照 略帶黃色澄明液體
    樣品稀釋液 無色或略帶黃色澄明液體
    濃縮洗滌液 無色或略帶黃色澄明液體
    底物液 無色或微藍色澄明液體
    終止液 無色澄明液體,低溫條件下可能會出現絮狀沉淀
    【用法與判定】 按以下步驟進行:
    1、需要自備的器材
    1.1 微量移液器;
    1.2 微量移液器配套使用的槍頭;
    1.3 用來稀釋洗滌液的500 ml量筒;
    1.4 適用于檢測96T微孔板的酶標儀;
    1.5 用于稀釋樣品的1.5 ml Ep管;
    1.6 蒸餾水或去離子水。
    2、樣品的制備 
    用樣品稀釋液將待檢血清樣品進行40倍稀釋(建議:5μl血清樣品加入195μl樣品稀釋液中),樣品加入包被板前要充分混勻,稀釋不同待檢樣品注意更換槍頭。注意:①制備血清用的血液樣本應無溶血現象發生;②不能稀釋陰性、陽性對照。
    3、操作步驟 (﹡使用前應輕輕旋轉或震蕩予以混勻,所有試劑應恢復至室溫
    3.1  在A1和A2孔中分別加入100μl陰性對照;
    3.2  在A3和A4孔中分別加入100μl陽性對照;
    3.3  取100μl稀釋好的待檢樣品加入相應孔中,并做好記錄;
    3.4  37℃孵育30min;
    3.5  將各孔的液體棄入廢液桶,每孔加250μl的洗滌液(試劑盒內20×濃縮洗滌液需用蒸餾水或去離子水稀釋后方可使用。如有結晶,需先溶解后,方可進行稀釋)進行洗板,重復5次,每次30s;
    *加液時防止各孔間洗滌液串流影響檢測結果,盡量將孔內洗滌液拋甩干凈;
    3.6  每孔加100μl酶標結合物;
    3.7  37℃孵育30min;重復步驟3.5;
    3.8  每孔加50μl底物液;
    3.9  37℃孵育10min(避光顯色);
    3.10  每孔加50μl的終止液;
    3.11  立刻于450nm波長處測定各孔的吸光度值,即OD450值。
    4、試驗有效性判斷
    4.1陰性對照:正常情況下,陰性對照孔OD450值≤0.3;
    4.2陽性對照:正常情況下,陽性對照孔OD450值≥0.6;
    4.3臨界值(C.O.)計算:臨界值=0.18+陰性對照均值;陰性對照OD450值大于0.3時應舍棄,如所有陰性對照OD450值均大于0.3時須重復實驗;陰性對照低于0.05時以0.05計算。
    4.4結果判定: 檢測樣品OD450值≥臨界值,判定該檢測樣品為陽性; 檢測樣品OD450值<臨界值,判定該檢測樣品為陰性。依據農業部山羊痘免疫和監測方案,免疫21天后,山羊痘病毒抗體ELISA檢測試驗抗體陽性判定為免疫合格。
    【注意事項】
    (1)待檢血清樣品數量過多時,應先使用血清稀釋板將所有待檢血清稀釋完畢后,再統一將血清樣品加入酶標板中,使反應時間一致。
    (2)試劑盒使用的過程中不要吸煙、喝水和吃東西。
    (3)底物液和終止液對皮膚有刺激性,注意防護。
    (4)底物液不要暴露于強光和任何氧化劑;使用潔凈的玻璃和朔料容器處理底物液。
    (5)所有試劑應在2~8℃存放;使用前恢復到室溫,使用后放回2~8℃。
    (6)注意防止試劑盒組分受到污染。
    (7)不要使用超過有效期的試劑,不同批次試劑盒的組分不要混用。
    (8)操作過程中的移液、時間和洗滌必須精確。
    【規格與包裝】96T×1
    【貯藏與有效期】2~8℃避光保存,有效期為12個月
    【聯系人】 王金良                                   電話:0543-3403060
    僅供獸醫診斷使用



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    編輯:熊方方




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